Дімітрова Вероніка ВячеславівнаДанилович Юрій Володимирович2024-08-202024-08-202024Дімітрова В.В. Кількісне визначення здатності до трансляції та метаболічного профілю в різних клітинних контекстах : кваліфікаційна робота бакалавра : 091 Біологія та біохімія / наук. кер. Ю. В. Данилович. Київ, 2024. 60 с.https://ir.library.knu.ua/handle/15071834/4208У цій роботі було валідовано одночасне кількісне визначення потенціалу трансляції та метаболічного профілювання за допомогою методу SCENITH на мононуклеарних клітинах периферичної крові. Також досліджено інтенсивність трансляції та метаболічні профілі Т-клітин під час активації. Крім того, аналіз SCENITH застосовано до адгезійних клітинних ліній здорових донорів за різних умов середовища. Було виявлено, що SCENITH ефективно розпізнає відомі метаболічні стани субпопуляцій Т-клітин та метаболічний зсув у бік гліколізу в активованих Т-клітинах. HEK клітини показали мінімальну залежність від окислювального фосфорилювання (OXPHOS), а дермальні фібробласти демонстрували чіткі метаболічні адаптації при різних умовах культивування. Отримані результати продемонстрували відтворюваність аналізу SCENITH, встановлюючи базовий рівень метаболічної активності в генетично незмінених клітинах. Ці результати можуть бути застосовані для вивчення метаболічних переваг зразків пацієнтів з мітохондріальними мутаціями. В подальшому, цей метод буде поєднано з відомими методами секвенування.In this work, it was validated the simultaneous quantification of translation capacity (TC) and metabolic profiling (MP) using the SCENITH method on Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs). SCENITH assay was conducted in T cells under different activation time points. Additionally, the SCENITH assay was applied to adherent cell lines from healthy donors under different medium conditions. It was found that the established SCENITH assay effectively resolved known metabolic states of T cell compartments. T cell activation SCENITH assay detected metabolic shift towards glycolysis in T cells expanded and activated in vitro. Moreover, it was observed that HEK cells showed minimal reliance on oxidative phosphorylation (OXPHOS) in our setup. Human Dermal Fibroblasts exhibited distinct metabolic adaptations under different culture conditions. The obtained results demonstrated the reproducibility and validation of the SCENITH assay, establishing a baseline for metabolic activities in genetically unaltered cell tissues. These findings can be further applied to study the metabolic preferences of patient samples with known mitochondrial mutations. Additionally, this methods aimed to be further implemented into sequencing-based methods.uaтрансляційна здатністьметаболічний станпроточна цитометріяпуроміцинметаболічна динамікаТ-клітиниtranslational capacitymetabolic capacityflow cytometrypuromycinmetabolic dynamicT cellsБакалаврська робота