КАЛАШНІКОВА, МаринаМаринаКАЛАШНІКОВА0000-0003-3621-6981САВЧУК, ОлексійОлексійСАВЧУККАРБОВСЬКИЙ, ВіталійВіталійКАРБОВСЬКИЙ2026-05-042026-05-042023КАЛАШНІКОВА, М., САВЧУК, О., КАРБОВСЬКИЙ, В. (2023). OPTIMIZATION OF AN ENZYME ELECTROPHORESIS METHOD FOR USING COLLAGEN AS A SUBSTRATE. Вісник Київського національного університету імені Тараса Шевченка. Біологія, 94(3). https://doi.org/10.17721/1728.2748.2023.94.41-4510.17721/1728.2748.2023.94.41-45https://ir.library.knu.ua/handle/15071834/19085Background. The optimized method of collagen-containing sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide electrophoresis is introduced in this work. The main parameters that affect the efficiency and resolution of the methodare the degree of sample dilution, the concentration of separation gel,the concentration of collagen solution which was used as a substrate, time of electrophoretic separation elongation. In order to investigate all active and pro-active forms of plasmin, all samples were prepared in two variations: with supplementary activation by streptokinase (Sk) addition, and without. Methods. To obtain clearly visible and detectable lysis points, samples with Sk were diluted in a ratio of 1:16, and samples without Sk were diluted in a ratio of 1:8. To prevent substrate migration and the loss of proteins' electrophoretic mobility, the concentration of was 15 % separation gel, and the concentration of copolymerized collagen solution was 1 mg/ml. To obtain the most informative results, the time of electrophoresis elongation was 15 min. After electrophoresis gels were washed in 2,5 % Triton X-100 solution for 1 hour and stained according to a standard protocol. Results. As a result of the conducted research, the optimal conditions for carrying out this enzyme-electrophoresis modification were found, according to all analytical manipulations, and methodical approaches to the detection of latent proenzymatic forms of enzymes with collagenolytic activity were shown. Conclusions. This modified technique can be used for quantitative and qualitative analysis of the presence of collagenolytic activity in various samples and allows research of enzymes that possess this activity, both from a scientific point of view, and in the process of finding and developing technologies for obtaining collagenolytic enzymes for biotechnological purposes.Вступ.  Представлено оптимізований метод ензим-електрофорезу з використанням колагену як субстрат. Основними параметрами, що впливають на ефективність та роздільну здатність методу, є ступінь розведення проб, концентрація розподільчого гелю, концентрація розчину колагену, кополімеризованого в розподільчий гель та час продовження електрофоретичного розділення. Методи. Для того, щоб дослідити всі активні та проактивні форми плазміну, усі зразки були приготовлені у двох варіаціях: з додатковою активацією, шляхом додавання стрептокінази (Ск), та без неї. Для отримання чітко видимих точок лізису зразки із Ск розводили у співвідношенні 1:16, а зразки без Ск розводили у співвідношенні 1:8. Для запобігання міграції субстрату та втрати електрофоретичної рухливості білків використовували розподільчий гель з концентрацією 15 %, а концентрація розчину колагену, кополімеризованого в гель, становила 1 мг/мл. Для отримання найбільш інформативних результатів час продовження електрофоретичного розділення становив 15 хв. Після електрофорезу гелі відмивали в 2,5 % розчині Тритон Х-100 протягом 1 год та фарбували відповідно до стандартного протоколу. Результати. У результаті проведенних досліджень було знайдено оптимальні умови проведення модифікації ензим-електрофорезу згідно з усіма аналітичними маніпуляціями та показано методичні підходи до виявлення латентних проферментних форм ензимів, яким властива колагенолітична активність. Висновки. Описану модифіковану методику можна використовувати для кількісного та якісного аналізу наявності колагенолітичної активності в різних зразках, що дозволяє проводити дослідження ферментів, яким властива така активність, як з наукових позицій, так і в процесі пошуку та розроблення технологій отримання ферментів-колагенолітиків для біотехнологічних цілей.enenzyme electrophoresiscollagencollagenolytic activityproteolytic activityenzyme electrophoresiscollagencollagenolytic activityproteolytic activityСтаття