РИМАР, Ю.Ю.РИМАРРУШКОВСЬКИЙ, С.С.РУШКОВСЬКИЙДЕМИДОВ, С.С.ДЕМИДОВВЕЛИКОЖОН, Л.Л.ВЕЛИКОЖОНПРОНІНА, О.О.ПРОНІНАМОРГУН, Б.Б.МОРГУН2026-05-042026-05-042020РИМАР, Ю., РУШКОВСЬКИЙ, С., ДЕМИДОВ, С., ВЕЛИКОЖОН, Л., ПРОНІНА, О., МОРГУН, Б. (2020). ADAPTIVE REGROWTH IN RESPIRATORY DEFICIENT STRAIN OF YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE DUE TO DELETION OF YKU70 GENE. Вісник Київського національного університету імені Тараса Шевченка. Біологія, 82(3), 53–58. https://doi.org/10.17721/1728_2748.2020.82.53-5810.17721/1728_2748.2020.82.53-58https://ir.library.knu.ua/handle/15071834/19169It is known that significant causes of malignant tumors are destabilization of the nuclear genome and mitochondrial dysfunction. Adaptive regrowth in yeast colonies (the appearance of cell subpopulations more adapted to unfavorable conditions under conditions of the death of the original culture) is used as a model of the initial stages of carcinogenesis. To study the features of the formation of adaptive regrowth, a reparation-defective and respiratory-deficient yeast strain of Saccharomyces cerevisiae was created. The thermosensitive mutation in the yku70 gene was used as an inducer of nuclear genome instability (at 37 оC it causes cell cycle arrest due to a reduction of the length of telomeric regions of chromosomes). Damage to the mitochondrial DNA of the ∆yku70 strain led to its respiratory deficiency (petite mutation). The isolated petite mutant ∆yku70 strain was cultured at optimal 28 оC and restrictive 37 оC temperatures, the state of the cell suspension was evaluated by light and fluorescence microscopy, to determine the viability of cells was used the analysis of microcolonies growth. Isolation of adaptive regrowth clones and analysis of their properties by the method of serial dilutions were conducted. To assess the genome stability of selected clones of adaptive regrowth, PCR analysis of the microsatellite sequences YOR267C, SC8132X, SCPTSY7 was conducted. When culturing the petite mutant of the strain ∆yku70 at a restrictive temperature of 37 оC for 7 days, the formation of viable subpopulations was detected, which can overcome the arrest of the cell cycle in the G2 / M phase. Further analysis of the isolated clones of adaptive regrowth showed that they differ in cell survival at restrictive temperature, resistance to UV radiation and the ability to form adaptive regrowth on colonies. In the analysis of microsatellite repeats in adaptive regrowth clones, no manifestations of instability of the studied sequences were detected.Відомо, що вагомими причинами розвитку злоякісних пухлин є дестабілізація ядерного геному та порушення функціонування мітохондрій. Виникнення вторинного росту на колоніях дріжджів (поява більш пристосованих до несприятливих умов клітинних субпопуляцій в умовах загибелі вихідної культури) використовують як модель початкових етапів канцерогенезу. Для вивчення особливостей формування адаптивного росту було створено репараційно-дефектний і дихально-дефіцитний штам дріжджів Saccharomyces cerevisiae. Як індуктор нестабільності ядерного геному застосовано термочутливу мутацію в гені yku70 (при 37 оС викликає зупинку клітинного циклу внаслідок скорочення довжини теломерних ділянок хромосом). Пошкодження мітохондріальної ДНК ∆yku70 штаму призвело до його дихально-дефіцитного стану (петіт мутація). Виділений петіт мутант ∆yku70 штаму культивували за оптимальної 28 оС та рестриктивної 37 оС температур, стан клітинної суспензії оцінювали за допомогою світлової та люмінесцентної мікроскопії, для визначення життєздатності клітин використовували аналіз росту мікроколоній. Проведено виділення клонів вторинного росту та аналіз їх властивостей методом серійних розведень. Для оцінювання стабільності дріжджового геному виділених клонів вторинного росту використано ПЦР-аналіз мікросателітних послідовностей YOR267C, SC8132X, SCPTSY7. При культивуванні петіт мутанта штаму ∆yku70 при рестриктивній температурі 37 оС на 7-му добу виявлено утворення життєздатних субпопуляцій, які можуть здолати зупинку клітинного циклу в G2/M фазі. Подальший аналіз виділених клонів вторинного росту показав, що вони відрізняються за виживаністю клітин при рестриктивній температурі, стійкостю до УФ випромінювання та здатністю до утворення вторинного росту на колоніях. За аналізу мікросателітних повторів у клонів вторинного росту не виявлено проявів нестабільності досліджуваних послідовностей.ukSaccharomyces cerevisiaeadaptive regrowthYKU70microsatellite instabilitySaccharomyces cerevisiaeвторинний рістYKU70мікросателітна нестабільністьБіологіяСтаття