Голуб Еліна ОлегівнаНипорко, Олексій ЮрійовичЕмілієн Сегре2024-08-162024-08-162024Голуб Е. О. Впровадження та оптимізація протоколів заморожування сперми райдужної форелі (Oncorhynchus mykiss, Walbaum) з особливим акцентом на вплив розмороженого молочка на успішність запліднення ікри : випускна кваліфікаційна робота магістра : 162 Біотехнології та біоінженерія / наук. кер. О. Ю. Нипорко, Е. Сегре. Київ, 2024. 77 с.https://ir.library.knu.ua/handle/15071834/4179Представлено результати порівняльного аналізу свіжого та кріоконсервованого молочка райдужної форелі (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) з фермерського господарства Viviers de Sarrance, що знаходиться у муніципалітеті Сарранс, Атлантичні Піренеї, Нова Аквітанія, Франція, та дослідження впливу різних концентрацій сперматозоїдів на успішність запліднення з метою оцінки біотехнологічного потенціалу використання кріоконсервованого молочка та доцільності впровадження його використання у виробничих протоколах. Проведено порівняльний аналіз концентрації та рухливості сперматозоїдів до та після кріоконсервації; показників запліднення, виживання на стадії вічка та вилуплення ікри, заплідненої свіжим або розмороженим молочком; виявлення впливу різних концентрацій на успішність запліднення (порівняння показників успішності запліднення, виживання на стадії вічка та вилуплення); дослідження можливості використання кріоконсервованого молочка у виробничих протоколах, що, як відомо, дозволяє оптимізувати використання кількості молочка форелі, мати молочко належної якості на виробництві незалежно від сезону та використовувати його в рамках програм селекції та розмноження. Отримані результати можуть бути використані для подальших досліджень, спрямованих на підтвердження ефективності протоколів, використаних у дослідженні, у великомасштабному виробництві та пошуках оптимальної концентрації для запліднення ікри без шкоди для рівня успішності запліднення ікри. Проведені експерименти включали такі етапи: вилучення статевих залоз, екстракція молочка, визначення концентрації сперми та рухливості сперматозоїдів, розведення сперми до цільової концентрації, кріоконсервація, запліднення ікри, тест на успішність запліднення та відслідковування смертності 3 рази на тиждень з усуненням мертвих ікринок. Проаналізовано концентрацію та рухливість сперматозоїдів, рівень успішності запліднення, виживання на стадії вічка та вилуплення. Встановлено, що нові протоколи запліднення для форелі є більш ефективними, ніж ті, що описані в літературі, адже ті не були адаптовані для форелі. Не було виявлено відмінності в успішності запліднення ікри свіжим та кріоконсервованим молочком. Коли сперматозоїди заморожуються, а потім розморожуються, спостерігається зменшення рухливості, однак нижча рухливість кріоконсервованої сперми жодним чином не впливає на високу успішність запліднення. Концентрації від 1,5 до 3 мільйонів сперматозоїдів на яйцеклітину показали найкращі результати запліднення. Рівень виживання при вилупленні був вищим за 80% у кожному зразку. Отже, кріоконсервацію молочка форелі можна оцінити як ефективний метод біотехнологічного застосування у виробництві та рекомендувати проведення подальших досліджень для підтвердження ефективності використаних протоколів у широкомасштабному виробництві з подальшим вибором оптимальної концентрації сперми, адже результати є дуже обнадійливими для впровадження у виробничі протоколи.In this study, the results of comparative analysis of fresh and cryopreserved sperm of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) from the fish farm Viviers de Sarrance, located in Sarrance, Pyrénées-Atlantiques, Nouvelle- Aquitaine, France, and study of the impact of different sperm concentrations on the fertilization success are presented to investigate the biotechnological potential of usage and the feasibility of implementing of cryopreserved milt in production protocols. Comparative analysis of sperm concentration and motility before and after cryopreservation was presented; as well as fertilization rates, survival rates at the eyed stage and hatching rates of eggs fertilized with fresh and thawed milt were compared; the influence of different concentrations on fertilization success (comparison of fertilization rates, survival at the eyed stage and hatching rates) was investigated; possibility of using cryopreserved sperm in production protocols was explored, which is known to optimize the use of the quantity of trout milt, to have milt of appropriate quality in production regardless of the season and to use it in selection and multiplication programs. These results can guide further studies aimed at confirming the efficiency of the protocols used in this study for largescale production, as well as determining the optimal sperm concentration for fertilizing eggs without compromising fertilization success. The experiments involved the following steps: stripping of gonads, milt extraction, determination of sperm concentration and sperm motility, dilution of sperm to the target concentration, cryopreservation, fertilization of eggs, fertilization test and mortality tracking of eggs three times a week with removal of dead eggs. Concentration and motility of spermatozoa, fertilization rate, survival and hatching rates were analyzed in this study. New fertilization protocols for trout have been found to be more effective than previously described in the literature, as they have not been adapted for trout. No difference in the fertilization success of eggs fertilized with fresh and cryopreserved milt was observed. When spermatozoids are frozen, then unfrozen, a drop of motility rate is observed, however, lower motility of cryopreserved sperm does not make any negative impact on high fertilization success. Concentrations range from 1.5 to 3 millions sperm cells/egg performed with the best fertilization results. Survival rates were higher than 80% in each sample. Thus, cryopreservation of trout sperm can be evaluated as effective biotechnological method for use in production. Further studies are recommended to confirm the efficiency of the used protocols in large-scale production and to determine the optimal sperm concentration. These results provide strong encouragement for the implementation of cryopreservation in production protocols.uaрайдужна форель (Oncorhynchus mykissWalbaum1792)кріоконсерваціязаморожування/розморожуваннясперма фореліякість спермизаплідненняrainbow trout (Oncorhynchus mykisscryopreservationfreezing/thawingtrout spermsperm qualityfertilizationМагістерська робота